La chromatographie couche mince (CCM)
La chromatographie couche mince est une méthode qui permet d'identifier un composé en fonction de son rapport frontal dans un solvant d'élution donné.
On peut également identifier un composé par comparaison de son rapport frontal avec celui d'une substance de référence.
La plaque de chromatographie est une plaque d'aluminium, sur laquelle a été déposé un polymère d'oxyde de silice. Ce support est donc polaire. On dépose la substance, dissoute dans un tube à essai contenant un peu d'éthanol, sur le point de dépôt à l'aide d'un capillaire. Puis quand le solvant est sec, on dépose la plaque dans son solvant d'élution. Les produits migrent en fonction de leur polarité. On calcule alors leur rapport frontal.
Celui ci s'exprime par le rapport : Rf = d/D
Avec d, distance de migration du produit mesurée au centre de la tâche ; et D, distance de migration du front de solvant.
Ainsi le Rf d'une CCM, est nécessairement inférieur à 1, et un Rf de 0,5 indique une migration en milieu de plaque.
Complément : La CCM semi quantitative
La CCM est habituellement une méthode purement qualitative et donc aucune évaluation des quantités de produits qui migrent sur la CCM n'est à priori possible.
Cependant la Pharmacopée préconise désormais une technique astucieuse pour rendre la CCM semi quantitative.
Prenons une solution S d'une substance A dissoute dans l'éthanol (par exemple) et la même solution S mais diluée au 100ème. Cette solution est déposée sur la CCM ainsi que la dilution au 100ème de la solution S. La CCM est ensuite éluée dans un solvant adéquat. Si l'exposition sous la lampe IR ou UV permet l'observation de l'impureté ( I ) avec la tâche A correspondante à la solution S, et que l'intensité de réponse à la lampe UV, IR de la tâche A dans la solution diluée au 100ème est du même ordre que celle de l'impureté I dans le puit S, alors l'impureté présente dans la solution est inférieure à 1 %.
